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重组断片的转化及克隆和用筛子选

重组断片的转化及克隆和用筛子选

1、注意事情的项目
关键要严明扼制热激时间,超过2min,则转化会败绩。
2、材料和办法
1.材料:结肠杆菌
2.摄谱仪:
离心思,恒温摇床,恒温水浴,超净办公台,冷柜
3.试药
LB营养物质; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ;
TFB:10mM MES(pH 6.3),45mM MnCl2, 10mM CaCl2, 100mM KCl
3、操作步骤
1. 感觉态细胞消融(在握心)
2. 参加溶于TE的待转化外源DNA,冰浴30min。
3. 42℃热冲击2 min。
4. 冰上2min。
5. 参加0.4 ml LB液体营养物质,37℃保暖摇床45 min
6. 取0.2ml菌悬液涂布在含氨苄盘尼西林、IPTG、X-gal营养物质上,37℃培育。
4、实验Z后结果及剖析:
培育皿上有白的颜色菌落和兰 色菌落,但兰色菌落数目很少。因为受体细胞本身的菌落为兰色,所以白的颜色菌落解释明白转化成功;兰色应为转化不了功。不过因为转化的质粒通过了酶切和连署,如果是在原酶切位点的连署施行的转化,菌落为白的颜色;若为酶切去一段DNA的的连署质粒施行的转化,菌落为兰色(解释明白在酶切上成功,连署上也成功,转化上也成功)。
 
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